Prosedur yang baik Pemeriksaan hitung jenis leukosit

PEMERIKSAAN HITUNG JENIS LEUKOSIT

Pendahuluan

                Tes apusan darah tepi (ADT) merupakan bagian yang terpenting dalam rangkaian tes hematologi. Tujuan tes ADT adalah mencari kemungkinan penyakit (suspected disease ) baik primer akibat kelainan hematologi maupunn sekunder akibat penyakit sistemik lainnya. Sejumlah informasi dapat diperoleh dari pengamatan sediaan ini, yang menunjang kepastian bentuk anemia (morfologik) , mengecek hasil pemeriksaan darah rutin, memeriksa hitung jenis leukosit yang terkonenksi dengan profil hematologi ADT.

Prinsip

                Dibuat apusan darah pada kaca objek. Prinsip pewarnaan didasarkan pada sifat kimiawi dalam sel. Zat warna yang bersifat asam akan bereaksi dengan komponen sel yang bersifat alkalis, demikian pula sebaliknya . pewarnaa sediaan apus menggunakan prinsip Romanowsky yaitu menggunakan dua zat yang berbeda, terdiri dari azure B ( trimethylthionnin ) yang bersifat basa dan Eosin Y ( tetrabromoflurescein ) yang bersifat asam sperti dianjurkan internasional council for standarization in hematologi (ISCB) dan pewarnaan yang dianjurkan khusus apusan darah tepi (ADT) adalah wrigh+ Giemsa dan may Grunwald  Giemsa- (MGG)

·         Persiapan Sampel  :

§  Darah kapiler segar akan menberikan morfologi dan hasil pewarnaan yang optimal pada ADT.

§  Darah  EDTA dapat dipakai (tidak berpengaruh terhadap marfologi eritrosit Dan leukosit serta mencegah agregasi trombsit ).Penggnaan EDTA sebaiknya dilakuaknan dalam waktu kurang dari dua jam (stabilitas spesimen darah.

·         Reagen :

§  Giemsa stain

§  Aquadest

§  Methanol

§  MGG stain

§  Buffer PH 6,4

§  Oil Imersi

§  Xilol

§  Kapas Alkohol 70 %

·         Alat

§  Lancet/ hemolet

§  Objek gelas

§  Gelas Ukur

§  Rak Pewarnaan

§  Pipet Pasteur.

·         Pembuatan Sediaan :

1.       Teteskan 1 tetes darah pada objek gelas bersih kering bebas lemak diameter ±2 cm pada sebelah kanan objek gelas

2.       Dengan tangan kanan letakkan kaca perata disebelah kiri tetesan darah

3.       Geraan kaca perata kekanan hingga menyentuh tetesan darah

4.       Biarkan darah menempel dan menyebar rata dipinggir kaca perata

5.       Segera geserkan kaca tersebut kekiri dengan sudut 30­⁰ – 45⁰ jangan menekan kaca perata tersebut kebawah

6.       Biarkan sediaantersebut kering diudara, beri kode ID dengan Pencil kaca

·         Pewarnaan sediaan :

1.       Letakkan sediaan apus yang telah difiksasi datas rak pewarnaan

2.       Genangi sediaan apus dengan zat warna MGG yang telah siap pakai biarkan 2 menit

3.       Tambahkan larutan buffer pH 6,4 sama banyak dengan larutan MGG yang telah diaberikan sebelumnya ( larutan dapat tercmpur rata dengan zat warna ), Biarka 2 menit

4.       Bilas, dan buang  sisa air

5.       Genangi  dengan larutan Giemsa 5%  biarkan 10 menit 10-15 menit

6.       Bilas dengan air mengalir, mula-mula dengan aliran lambat kemudian dengan aliran yang kuat dengan tujuan menghilangkan semua kelebihan zat warna

7.       Letakkan sediaan dalam sikap vertikal ddan biarkan mengering sendiri

8.       Kemudian baca di bawah mikroskop.